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His融合蛋白纯化常见问题解答


发布时间:

2023-03-07

蛋白过镍柱纯化的原理:Ni-NTA纯化介质纯化带有His6-Tag的融合蛋白是目前蛋白纯化中最常使用的一种方法。Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋白蛋白结合,组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。

His融合蛋白纯化常见问题解答

  蛋白过镍柱纯化的原理:Ni-NTA纯化介质纯化带有His6-Tag的融合蛋白是目前蛋白纯化中最常使用的一种方法。Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋白蛋白结合,组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。在蛋白上样后,带有组氨酸标签的蛋白特异性结合到柱子里,其他的杂蛋白流出。Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍也可以与咪唑结合,采用咪唑洗脱,咪唑竞争性结合到硫酸镍上,目的蛋白就被洗脱了,这时候收集穿出液,里面就是目的蛋白,然后透析掉咪唑即可。上样,清洗,洗脱,基本三个步骤就结束了。

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